Silje Marie Bache

I dagens samfunn utsettes mennesker i stor grad for den hormonforstyrrende forbindelsen bisfenol A (BPA), som finnes i mange ulike plastprodukter. Det er stor bekymring for helseeffekter av denne eksponeringen, og det pågår en intens forskning på området for å finne ut av stoffets skadevirkninger. I kroppen metaboliseres både fremmedstoffer, som BPA, og endogene forbindelser i en prosess som kalles biotransformasjon. Kjernereseptorer er ligandaktiverte transkripsjonsfaktorer, og er ansvarlige for reguleringen av enzymene og transportproteinene involvert i biotransformasjonen. En svært viktig kjernereseptor i metabolismen av fremmedstoffer er steroid og xenobiotika reseptor (SXR, NR1I2). SXR kan binde til kjemisk svært forskjellige ligander med ulik størrelse, og er således en viktig sensor for fremmedstoffer i lever og tarm hvor den hovedsakelig er uttrykt. I tillegg til å bli aktivert av ligand kan den på lik linje med andre kjernereseptorer aktiveres ved interaksjon med andre proteiner, og ved posttranslasjonelle modifikasjoner som resultat av ikke-genomisk signalering. Det er et økende fokus hvordan endokrinforstyrrende forbindelser påvirker ikke-genomiske signaleringsveier i cellene. Hovedmålet med denne oppgaven var å undersøke om BPA kunne være involvert i aktivering av SXR-avhengig transkripsjon via ikke-genomisk PKA-signalering i den humane levercellelinjen HepG2.

I denne oppgaven ble q-PCR og luciferase reporteranalyser brukt for å måle SXR-avhengig transkripsjon av målgenet CYP3A4. Videre ble SXR-avhengig transkripsjon av luciferase undersøkt i et reportersystem med XREM CYP3A4 promotorelement. Transkripsjonell aktivering ble undersøkt etter eksponering av HepG2 celler for ulike konsentrasjoner BPA, antagonister og agonister for protein kinase A (PKA) og G-proteinkoblet reseptor (GPR30). Sistnevnte er en mulig reseptor involvert i PKA-signaleringen. For å undersøke rekruttering av SXR til CYP3A4 promotoren etter BPA-eksponering ble det gjort innledende forsøk med kromatin immunpresipitering (ChIP). Resultatene viste at BPA aktiverte SXR-avhengig transkripsjon ved konsentrasjoner tilsvarende 5, 10 og 20 μM BPA. Resultatene bekrefter tidligere studier som viser at mikromolare konsentrasjoner BPA kan aktivere SXR-avhengig transkripsjon, men viser at effekten er større enn det som er sett tidligere. Videre bekrefter resultatene at PKA-signalering hemmer uttrykk av CYP3A4 i HepG2 celler, selv om det ikke kunne trekkes noen konklusjoner om PKA-signaleringen kunne aktiveres av BPA. Det var også vanskelig å trekke noen konklusjoner fra ChIP.

---

Silje leverte masteroppgave i molekylærbiologi til graden Master of Science i november 2010