Prøvepreparasjon for væskefase-NMR

NMR-rør kommer i ulike lengder, diametere og former. De vanligste lengdene er 10,4 cm (4") og 17,8 cm (7"), mens de vanligste diametrene er 3 mm og 5 mm. I tillegg til det standard sylindriske røret kan du støte på Young-rør for atmosfærisk kontroll og Shigemi-rør for lavt volum. Bruk aldri delvis ødelagte NMR-rør.

600 MHz og 850 MHz

600 MHz og 850 MHz instrumentene er utstyrt med SampleJet prøvevekslere. Prøvevekslerne kan bruke både 3 mm og 5 mm-rør, samt både lange (7"/18 cm) og korte (4"/10 cm) rør. I prøveveksleren holdes de lange rørene og korte rør i rack 1 på 600 MHz ved romtemperatur. Alle andre racks er kjølt (5 °C). Originale SampleJet-korker fra Bruker med kode må brukes. Når du bare bruker 600 MHz eller 850 MHz, anbefales det å bruke "Unracked 4" NMR-tubes with coded closed caps" (Z172599 eller Z172597), som kan skaffes fra Bruker Labscape eller Cortecnet.

Begrensninger

Spesial-NMR-rør, som Young- og Shigemi-rør er ikke kompatible med SampleJet. Skal disse rørene brukes må de settes inn manuelt, uten prøveveksleren. Dette krever ekstra opplæring eller assistanse, og 850 MHz bør brukes for å unngå problemer med IconNMR-køen.

60 MHz og diffusjon på 500 MHz wide-bore

For disse instrumentene må 17,8 cm NMR-rør med 5 mm ytre diameter brukes. Vi anbefaler “Unracked 7" NMR-tubes with coded closed caps” (Z172600) som kan kjøpes fra Bruker Labscape eller Cortecnet. Disse rørene er rimelige (~30 NOK/rør) og de kommer med SampleJet-kork som gjør dem kompatible med 600 MHz og 850 MHz. Young-rør kan også benyttes og andre lange 5 mm-NMR-rør kan også brukes. For 500 MHz kan også lange 3 mm NMR-rør brukes.

Merking av NMR-rør

Aldri bruk klisterlapper på NMR-rør da de kan falle av. Det er mulig å øverst på lange NMR-rør, men unngå alle former for merking på korte 10 cm NMR-rør. Bruk koden på korkene til å spore prøven. Koden må være intakt. 

Vi anbefaler 600 µL i 5 mm NMR-rør og 200 µL i 3 mm NMR-rør (rundt 5 cm). Ikke bruk mindre enn 4 cm væskehøyde, da det kan gi problemer med shimming. Overfylling av rør kan også gi problemer. For mindre volumer enn 160 µL, bruk Shigemi-rør.

For å unngå kraftige signaler fra løsemiddelet bør deutererte løsemiddel brukes. Det finnes en rekke løsemidler å velge mellom, og de vanligste er CDCl₃, DMSO-d₆, C₆D₆, MeOD, CD₂Cl₂ og D₂O. Enkelte blandigner er også mulig. 

Det er også mulig å bruke H₂O som løsemiddel, men da må du tilsette rundt 10% D₂O for lås/lock. Når protonerte løsemidler benyttes må løsemiddelsignalet undertrykkes. Dette setter en liten begrensning for hvilke NMR-eksperimenter som kan velges. Hvis det er nødvendig med buffer så er det fordelaktig å bruke en fosfatbuffer, da denne ikke har kovalent bunnet protoner. Unngå høy ionestyrke.

Det anbefales å bruke løsemiddel som inneholder en kjemisk skift referanse (TMS for organiske løsemidler og delvis deuterert DSS/TSP). For å unngå bakteriell nedbrytning kan det være fornuftig å tilsette 0.02% NaN₃ når man arbeider med biologiske prøver.

• Prøven bør være partikkel-fri
• Konsentrasjon: typisk i millimolar-området. Deteksjonsgrensen for ¹H er rundt 1 µM